簡要描述：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料檢測自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞自噬流，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，可以在活細(xì)胞中監(jiān)控細(xì)胞自噬的快速定量方法。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
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CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料檢測自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞自噬流，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。染料已通過優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，可以在活細(xì)胞中監(jiān)控細(xì)胞自噬的快速定量方法。 |
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit |
◆特點
● 無需轉(zhuǎn)染，定量監(jiān)測活細(xì)胞中的自噬情況
● 免去 LC3-GFP 轉(zhuǎn)染所需的時間和精力以及轉(zhuǎn)染效率的驗證
● 含有特殊基團的染料選擇性地染色自噬小泡
● 試劑盒中包含已知活性的自噬抑制劑與激活劑
● 快速量化原生異質(zhì)性細(xì)胞群中的自噬
● 選擇性地染色，可檢測和區(qū)分自噬流（autophagic flux）和自噬溶酶體的積累
● 不染溶酶體，減少其他染料的背景干擾
● 便于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑
◆原理
該產(chǎn)品所用探針是陽離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，以類似誘導(dǎo)磷脂藥物的方式迅速進入到細(xì)胞中。染料的功能基團能夠選擇性標(biāo)記與自噬通路相關(guān)的小泡，而不會在溶酶體中聚集。
胞內(nèi)物質(zhì)被擴大的膜囊包裹，吞噬泡形成雙層膜囊泡，成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合，和內(nèi)部物質(zhì)被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調(diào)節(jié)因子也被描繪于圖中。 |
自噬原理圖 |
◆應(yīng)用
省時省力，無需轉(zhuǎn)染即可自快速全面的標(biāo)記自噬小泡 為了演示 CYTO-ID® Green detection reagent 的優(yōu)勢，先用 RFP-LC3 表達載體轉(zhuǎn)染 HeLa 細(xì)胞，10 μM 的 Tamoxifen 處理過夜，然后用 CYTO-ID® 綠色檢測試劑染色。LC3 轉(zhuǎn)染法需要過夜，而 CYTO-ID® 綠色檢測試劑的方法在15-30分鐘內(nèi)標(biāo)記細(xì)胞達100％。圖A：綠信號顯示自噬小泡的 CYTO-ID® 綠染;圖B：成功轉(zhuǎn)染細(xì)胞的 RFP-LC3 表達（紅色）；圖C：自噬體的特異性標(biāo)記 LC3，與 CYTO-ID® 綠色染料標(biāo)記的小泡共定位的復(fù)合圖像。 | 的發(fā)放 |
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無轉(zhuǎn)染的自噬檢測 Hela細(xì)胞進行饑餓與恢復(fù)，然后使用 CYTO-ID® Green detection reagent 標(biāo)記。染料可以明確檢測和量化自噬及與自噬誘導(dǎo)相關(guān)的自噬小泡前體。圖1A：穩(wěn)定表達 GFP-LC3 的CHO細(xì)胞，結(jié)果顯示對照組與饑餓的細(xì)胞群的相對較差的基線分離，自噬難以量化。圖1B：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 特異性標(biāo)記 LC3 蛋白依賴的自噬小泡，免去轉(zhuǎn)染操作。 |
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自噬積累和自噬流的可視化 可用熒光顯微鏡觀察CYTO-ID® 自噬綠色染料檢測的自噬液泡積累和自噬流。Hela細(xì)胞用以下試劑進行模擬誘導(dǎo)，0.2% DMSO（A）和100 μM Clonidine hydrochloride（B）進行誘導(dǎo)，5 μM Loperamide hydrochloride 和 1 μM PP242 hydrate（D）在37°C誘導(dǎo)12小時。處理后，細(xì)胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent 孵育10分鐘，再用分析緩沖液清洗。細(xì)胞核被 Hoechst 33342 染料復(fù)染為藍(lán)色。 |
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避免非特異性溶酶體染色的背景干擾 相比其他 MDC 染色溶酶體檢測，CYTO-ID® 綠色染料無溶酶體染色背景，CYTO-ID® Autophagy kit 無需紫外活細(xì)胞分析，在顯微鏡共標(biāo)記應(yīng)用中，與 Hoechst 染料兼容。 |
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使用流式細(xì)胞儀通過 CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 分析自噬 對照組（紅線峰值）無誘導(dǎo)，10 uM Tamoxifen（ALX-550-095）處理 Jurkat 細(xì)胞（白血病T細(xì)胞）（藍(lán)線峰值）。處理18小時后，細(xì)胞結(jié)合 CYTO-ID® 綠色檢測試劑，然后不經(jīng)過流式細(xì)胞儀清洗，進行分析。結(jié)果通過直方圖呈現(xiàn)。對照組細(xì)胞被染色，但熒光亮度低。實驗組中，CYTO-ID® 綠色熒光信號增加約２倍，表明 Tamoxifen 處理能引起 Jurkat 細(xì)胞中自噬的增加。 |
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使用 mTOR 激酶抑制劑 Rapamycin 處理 HepG2 細(xì)胞孵育過夜，結(jié)果顯示 CYTO-ID® 染色信號升高。 |
CYTO-ID® 綠色染料大多與 RFP-LC3蛋白共定位。0.1 μM Rapamycin（典型自噬誘導(dǎo)劑）處理過夜，轉(zhuǎn)染 Hela 細(xì)胞表達RFP-LC3。 A: CYTO-ID® Green 染色； B: RFP-LC3； C: 合成圖像。 |
CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒 2.0
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 備注 | 應(yīng)用 |
ENZ-51002-25 | GFP-Certified® Apoptosis/Necrosis detection kit 細(xì)胞凋亡/壞死檢測試劑盒 | 25 assays | 多重檢測，區(qū)分正常、早期凋亡、晚期凋亡和壞死細(xì)胞，與GFP和其他綠色熒光探針兼容。 | FC，熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-51002-100 | 100 assays | |||
ENZ-51021-K200 | Nuclear-ID® Green hromatin condensation detection kit 細(xì)胞核綠色染色體皺縮檢測試劑盒
| 1 Kit | 高滲透性的綠色熒光染色增強了細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)染色質(zhì)固縮。 | FC，熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-52406 | NUCLEAR-ID® Red DNA stain DNA染色試劑盒（紅色熒光） | 200 µL | 細(xì)胞可滲透的DNA染色應(yīng)用廣泛。 | ≥93％（HPLC），F(xiàn)C，熒光檢測 |
ENZ-CHM103-0200 | Nuclear-ID® Blue DNA stain (GFP-Certified® ) Nuclear ID® 藍(lán)色DNA染色（GFP細(xì)胞系） | 200 µL | 細(xì)胞可滲透的DNA染色應(yīng)用廣泛。 | ≥93％（HPLC），F(xiàn)C，熒光檢測 |
ENZ-51015-KP002 | Lyso-ID® Red cytotoxicity kit (GFP-Certified® ) 溶酶體細(xì)胞毒理檢測試劑盒（紅色熒光） （綠色細(xì)胞系） | 1 Kit | 快速，定量和HTS-兼容的檢測活細(xì)胞毒性試劑。 | 熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-51035-0025 | PROTEOSTAT® Aggresome etection kit 蛋白內(nèi)穩(wěn)態(tài)聚集體 檢測 試劑盒 | 25 tests | Robust、定量的聚集小體用于神經(jīng)退行性疾病，肝病和毒理學(xué)研究 | FC，熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-51035-K100 | 100 tests |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| ENZ-51031-K200 | Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬檢測試劑盒 | 200 tests | - | - |
| ENZ-51031-0050 | Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬檢測試劑盒 | 50 tests | - | - |
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