細胞培養的知識總結

　　每一個實驗新手們剛進實驗室操作細胞，都是緊張興奮又手忙腳亂，就從最基本的養細胞來說，大家剛開始一定覺得理論知識看起來很容易，但是，在實際情況中一般是這樣的——“到底怎么回事，細胞長不好/細胞又死了/又污染了......"

　　這時，如果有一份靠譜的細胞培養經驗總結，或許可以幫助你少走彎路，今天就為大家分享一下由我們實驗室總結的細胞培養過程中的知識總結，讓你事半功倍。

　　首先，我們來看看，什么是細胞培養：

　　細胞培養是指細胞在體外的培養技術，即在無菌條件下，從機體中取出組織或細胞，模擬機體內正常生理狀態下生存的基本條件，讓它在培養皿中繼續生存、生長和繁殖的方法。通過細胞培養我們可以獲得大量的、性狀相同的細胞，以便于研究細胞的形態結構、化學組成及功能和機制。

　　細胞真的很脆弱，就像小嬰兒一樣，需要你無微不至的關懷。

　　培養細胞之前，你需要做好這些準備：

　　1、耗材的處理、

　　玻璃器皿的清洗，對于玻璃器皿(細胞瓶、裝營養液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干凈(注意死角)，然后沖干凈。用酸液浸泡24 h以上，之后用清水沖洗數遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。

　　2、試劑的配置

　　試劑配置，細胞培養用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調節。

　　3、無菌檢驗

　　無菌檢驗，主要采用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418溶液、各類培養基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如PBS、D-Hank's等。

　　不同細胞對培養基的要求是不同的，要根據自己的細胞要求使用。

　　細胞培養中最重要的步驟——無菌操作

　　實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后，才開始實驗操作。

　　每次操作只處理一株細胞株，避免細胞間交叉污染。

　　實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，再次以70%ethanol擦拭無菌操作臺面。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區域，一般不要再邊緣區域操作。

　　細胞培養后期——定期觀察

　　你最好做到每天都去探望探望它們，看看他們的成長情況

　　1、檢查培養液顏色與透明度的變化，顏色變黃，說明PH值下降;變紅或紫紅色，說明PH值上升，細胞生長停滯、死亡，一般生長穩定的細胞2-3天換液一次，生長緩慢的細胞可3-4天換液一次。

　　2、觀察細胞生長狀態，細胞長滿瓶底的80%，應及時傳代。

　　3、觀察細胞形態變化，細胞透明度大、折光性強、輪廓清晰為佳。

　　4、注意微生物污染，常常出現培養液混濁，液體內漂菌絲或細胞菌，不僅僅指微生物，包括所有混入培養環境中的細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物及細胞。

　　細胞培養之——污染篩查

　　你培養的細胞被污染了，無非是下面幾個污染途徑：

　　1、空氣是微生物傳播的最主要途徑，操作時盡量避免說話、咳嗽、打噴嚏;

　　2、使用的培養器械及器皿清洗消毒不干凈;

　　3、培養兩種以上細胞時，操作不規范，可能導致細胞交叉污染;

　　4、血清有問題，可能血清在生產時就已經被支原體或病毒污染;

　　5、原代培養的污染多數來源于組織樣本。